Etablering av metode for anrikning og deteksjon av sirkulerende tumorceller i perifert blod

Abstract

Kreftceller som sirkulerer med perifert blod kalles sirkulerende tumorceller (STC). Under de rette forholdene kan disse gi opphav til nye svulster i andre organer (spredning). Kreft i bukspyttkjertelen er den fjerde største kreftrelaterte dødsårsaken i Norge, noe som i hovedsak skyldes at den er vanskelig å oppdage samt ineffektiv kjemoterapibehandling. Forskning tyder på at påvisning av STC kan gi klinisk relevant informasjon ved en rekke kreftformer. Hensikten med denne masteroppgaven var derfor å etablere en metode for anrikning og deteksjon av STC fra perifert blod, da tilknyttet bukspyttkjertelkreft. Oppgaven inngår i et større forskningsprosjekt ved Stavanger Universitetssykehus i regi av forskningsgruppen for kreft og medisinsk fysikk ved Avdeling for blod og kreftsykdommer. Blodprøven tas på EDTA-rør og anrikningsmetoden er bruk av tetthetsgradientmediet LymphoprepTM. Disse ble kvalitetsvurdert og det ble funnet lite tap av mononukleære celler og celleaggregat. Holdbarheten til EDTA-blod ble fastsatt til maksimalt 48 timers henstand før anrikning av STC bør utføres. Deteksjonsmetoden er RT rt-qPCR hvor epitelspesifikke mRNA benyttes som surrogatbiomarkører for STC. De potensielle biomarkørene som ble etablert og undersøkt var CEACAM5, CEACAM6, CK8, CK19, EPCAM, MMP11 og PRSS1. Basert på undersøkelser av tre cellelinjer fra svulster i bukspyttkjertel og normalt blod, viste biomarkørene CEACAM5, CK8, CK19 og EPCAM beste potensial for STC deteksjon.